产品名称
通用名：人C肽（C-P）测定试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Quantitative determination kit for Human C-Peptide (ELISA)
包装规格
本试剂盒为48人份/盒或96人份/盒。
预期用途
本试剂盒用于体外实验测定人血清中C肽（C-P）的含量。
胰岛素的合成首先是在胰岛β细胞中合成胰岛素原（Proinsulin），胰岛素原在酶的作用下裂解，释放出胰岛素以及在胰岛素原中连接胰岛素A链和B链的一段多肽（connection peptide），因此被称为C肽（C-Peptide）。人C肽在血液循环中的生物半衰期比胰岛素长2~5倍，因此C肽的水平更能稳定地反应胰岛素分泌的情况，并且可用于区分内源性胰岛素与注射胰岛素。
检测原理
采用酶联免疫夹心法测定血清中C肽含量。首先用一株单抗包被微孔板，制成固相抗体，然后加入待测血清及用辣根过氧化物酶标记的另一株单抗，使之形成包被抗体-C肽-标记抗体的复合物，经显色后在酶标仪测定吸光值（OD值），通过计算机或作图拟合浓度-吸光度曲线，反算出待测血清中C肽含量。
适用仪器
各种型号酶标仪，必配450nm滤光片，选配600-630nm滤光片。
适用于各种类型的洗板机。
样本要求
取血样后分离血清（3000rpm离心6分钟以上），血清样本收集后应尽快置-20℃冻存。如当天检测也可以置2-8℃贮存，样本应避免反复冻融。样本使用前应置室温（18-25℃）融化并充分摇匀，平衡至室温后再行测试。
主要组成成分
组分/规格 | 96T | 48T | 主要成分 |
预包被板 | 96孔 | 48孔 | 包被抗C-P抗体 |
标准品一套 | 冻干粉×6瓶 | 冻干粉×6瓶 | C-P |
酶标抗体 | 6ml | 3ml | HRP-抗-C-P |
浓缩洗涤液（20×） | 15ml | 15ml | NaCl，磷酸盐，吐温-20 |
样本稀释液 | 6ml | 3ml | 蒸馏水，Proclin-300 |
显色剂A | 6ml | 3ml | 过氧化脲素 |
显色剂B | 6ml | 3ml | TMB |
终止液 | 6ml | 3ml | 稀硫酸 |
封板膜 | 2张 | 2张 |
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说明书 | 1份 | 1份 |
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密封袋、干燥剂 | 1套 | 1套 |
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标准品S0-S5用0.5ml蒸馏水溶解后，浓度如下
单位 | S0 | S1 | S2 | S3 | S4 | S5 |
ng/ml | 0 | 0.3 | 1 | 2 | 4 | 8 |
各组分应在使用前充分混匀。
储存条件及有效期
试剂盒保存于2-8℃。有效期为12个月，请在试剂盒标注的有效期内使用。
微孔板打开后应置有干燥剂的封口袋中密封防潮保存。
标准品溶解后应冻存（-20℃）。
检验方法
操作步骤
1、将各种试剂移至室温（18-25℃）平衡半小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水1:20稀释，混匀后备用。
2、标准品S0-S5，第一次使用前先用0.5ml蒸馏水溶解，放置混匀10分钟后使用。
3、将预包被板从密封袋中取出，设一个空白对照孔，不加任何液体；每个标准点依次各设两孔，每孔加入相应的标准品50μl；其余每个检测孔直接加待测血清50μl。
4、每孔（空白孔除外）加入酶标抗体50μl，充分混匀，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育1小时。
5、手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复3次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。
6、每孔（包括空白孔）加显色剂A液50μl、显色剂B液50μl，振荡混匀后，置37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50μl。
7、用酶标仪读数（450nm），用空白孔调零，测定各孔OD值。
数据处理
1、手工作图：用双对数坐标纸，以标准品浓度为横轴，以对应的OD值为纵轴，画出平滑曲线或直线，在曲线上按照待测血清OD值找到对应的浓度值。
2、计算器/机：使用线性拟合功能，标准品S1到S5浓度取对数（Log(浓度)），作为X，将对应的吸光值取对数（Log(OD)）作为Y，选择双对数（或称全对数）Log-Log拟合方程：Log(OD1-5)=k Log(浓度1-5)+s，k，s为直线参数。从拟合线上计算出待测血清的浓度。
参考范围
1、正常人空腹血为0.56-3.25ng/ml，餐后1小时为2.88-10.1ng/ml，餐后/空腹比值一般应>2倍（本公司实测结果为1.74-7.49倍）。餐后3小时下降至接近空腹。
此参考值为本实验室在严格条件下的测定结果，各实验室应当建立自己的参考值范围。
2、2016年12月1日本实验室测定11名献血员空腹及餐后血，计算出参考范围如下：
| 空腹 | 30分钟 | 60分钟 | 120分钟 | 180分钟 | 60分钟/空腹 |
最大值 | 3.25 | 8.35 | 10.06 | 6.19 | 3.62 | 6.69 |
最小值 | 0.60 | 1.92 | 3.66 | 1.59 | 0.54 | 1.63 |
均值 | 1.67 | 4.18 | 4.51 | 3.08 | 1.74 | 3.63 |
参考范围 | 0.56-3.25 | 1.92-8.35 | 2.88-10.1 | 1.59-6.19 | 0.54-3.62 | >1.6 |
检测方法的局限性
溶血、乳糜血样本影响测定结果。
产品性能指标
1、灵敏度：≤ 0.10 ng/ml。
2、精密度：变异系数：（CV<15%）
3、特异性：与 Pro-insulin，INS的交叉反应符合要求。
注意事项
1、本品仅供体外实验。
2、双波长仪器可以不设空白孔，也无需调零。
3、做实验前必须将试剂盒恢复至室温，加试剂前应先摇匀，加样中应避免交叉污染。
4、温育反应过程中必须粘贴封板膜。
5、不同批次试剂不能混用。
6、结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
7、试剂含有动物源性物质，应按实验室有关规定处置。
