一、产品简介:
该检测基于 IgG 抗体与 IgG 抗原间的反应,形成免疫复合物,在 700nm 波长处检测其浊度变化,其变化程度与样本中的 IgG 含量成正比。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称 规格 保存要求 备注试剂一 液体 28mL×1 瓶 4℃保存试剂二 液体 5.5mL×1 瓶 4℃保存标准管 液体 0.1mL×1 支 4℃保存 浓度为 28.4g/L
三、所需仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液器、离心机、蒸馏水。
四、免疫球蛋白 IgG 含量检测:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
1、 样本:① 血清,肝素或 EDTA 抗凝血浆。② 血清或血浆应当在收集后 2 小时内血细胞中被分离。 2℃-8℃下保存3 个月。③ 样本中胆红素≤600µmol/L,溶血≤5g/L,血脂≤5g/L 时未观察到明显干扰。
2、上机检测:① 打开酶标仪,设定波长到 700nm。② 所有试剂解冻至室温(25℃)或于 25℃水浴条件下孵育 5-10 分钟,在96 孔板中依次加入:试剂名称(μL) 测定管空白管(仅做一次)标准管(仅做一次)样本 2蒸馏水 2标准品 2试剂一 200 200 200混匀,37℃孵育 5min 后,于 700nm 处读取 A1。试剂二 40 40 40混匀,37℃孵育5min后,于700nm处读取A2,△A=A2-A1。
【注】:1.若△A 值小于 0.005,可增加样本加样体积 V1(如由 2μL 增至 5μL,空白管也由2μL 增至5μL 蒸馏水,标准管仍然为 2μL+3μL 蒸馏水(总体积同测定管和空白管即 5μL);其他试剂均保持不变),则改变后的 V1 代入公式重新计算。2.若△A 值大于 0.5,可对样本用蒸馏水或生理盐水稀释后测定,则稀释倍数 D 带入公式计算即可。
五、结果计算:
1、按照体积计算:免疫球蛋白 IgG=(C 标准×V2)×(△A 测定-△A 空白)÷(△A 标准-△A 空白)÷V1×D=28.4×(△A 测定-△A 空白)÷(△A 标准-△A 空白)×D
C 标准---标品浓度,28.4g/L; V1---加入样本体积,0.002mL;V2---加入标准品体积,0.002mL; D---稀释倍数,未稀释即为1。