苏州艾莱萨生物科技有限公司

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全能核酸酶
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全能核酸酶
编号: MR2019
品牌: ELSBIO
规格: 10kU/25kU/50kU/100kU/1000kU
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价格规格: 350/550/950/1650/10650
应用: 广泛
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I. 产品信息

目录号:MR2019               规格:10kU, 25kU, 50kU, 100kU, 1000kU

CAS9025-65-4                纯度:≥97% (SDS-PAGE)

分子量:27.9 kD                酶活:≥100 U/μl

储存液:20 mM Tris-Cl (pH8.0)2 mM MgCl22 mM NaCl 50%甘油

保存条件:-20℃可保存2

II. 产品简介

全能核酸酶又称广谱核酸酶,是一种来源于Serratia marcescens,经基因工程改造的核酸内切酶。它可以降解所有形式的DNARNA (包括单链、双链、线状、环状、天然以及变性的核酸),生成3 - 5个碱基长度的5’-单磷酸寡核苷酸,且不具有碱基识别特异性。另外,全能核酸酶在非常广泛的条件下6 M urea0.1 M Guanidine HCl0.4% Triton X-1000.1% SDS1 mM EDTA1 mM PMSF都能保持很高的稳定性和消化活力,高效去除样本或制品中的核酸残留,提升样本纯度和制品生物功效,非常适用于作为各类科学研究以及疫苗、蛋白、多糖类制药工业的首选酶制剂。

活性单位定义:37℃pH 8.0反应条件,2.625 ml反应体系中,在30分钟内使△A260吸收值变化1.0(相当于完全消化37μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸)所用的酶量定义为一个活性单位(U)。本产品在使用时可用稀释缓冲液(20 mM Tris-Cl (pH8.0)2 mM MgCl22 mM NaCl)稀释后,再使用。

III. 反应条件

条件

最优条件

有效条件

Mg2+

1-2 mM

1-10 mM

pH

8.0-9.2

6.0-10.0

温度

37℃

0-42℃

Dithiothreitol (DTT)

0-100 mM

>100 mM

8-Mercaptoethanol

0-100 mM

>100 mM

一价阳离子浓度 (Na+K+)

0-20 mM

0-150 mM

PO4 3-浓度

0-10 mM

0-100 mM

注:最优条件为全能核酸酶释放≥90%活力的条件,有效条件为全能核酸酶释放≥15%活力的条件。

IV. 产品应用

1. 用于除去生物制品中的DNA/RNA

美国FDA对治疗用每剂量的生物制品的核酸含量要求为低于10 pg,国内对此相应的要求为低于100 pg。 全能核酸酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工业生物制品中核酸的去除,使生物制品的最终核酸含量符合要求,同时提高生物制品功效。

2. 用于降低细胞破碎后的粘度

全能核酸酶可以降解所有形式的核酸,降低细胞裂解液的粘度,提高蛋白得率,改善分离效果,使之易于过滤(尤其是超滤),利于下游层析纯化操作。

3. 用于细胞培养来源产物的纯化过程

核酸很容易粘附在病毒样颗粒(VLP)、病毒粒子、包涵体等细胞生成颗粒的表面,使颗粒大小或电荷发生改变,造成这些颗粒的聚集,如外周血单细胞(PBMC)存放过程中的结块现象。全能核酸酶可有效降解核酸,避免核酸对细胞产物的影响以及纯化效率,利于提高细胞产物纯化效率。

4. 用于生化分析样品的制备

ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程中,用全能核酸酶处理含有核酸的蛋白样品,可提高分辨率,并提高回收率。

5. NGS样本制备、蛋白组学样本制备等前沿研究

V. 使用方法

1. 细胞处理

a. 贴壁细胞去除培养基,用PBS洗涤后,加入1 ml RIPA 裂解液 (或其他哺乳动物细胞裂解液) 0.5 - 5 μl 全能核酸酶,室温或冰上孵育30分钟,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。

b. 悬浮细胞离心收集后,在离心管中加 1 ml RIPA 裂解液 (或其他哺乳动物细胞裂解液) 0.5 - 5 μl 全能核酸酶,室温或冰上孵育30分钟,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。

2. 组织样品处理

30 - 100 mg动物或者植物组织研磨充分后,加入100 - 200 μl 裂解液,同时加入0.5 - 5 μl 全能核酸酶,室温或冰上孵育30分钟,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。 3. 大肠杆菌或者其他细菌处理

细菌离心收集后,用裂解液裂解或者研磨破碎后,每1 ml 0.5 - 5 μl 全能核酸酶,室温孵育30分钟,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。

注:若溶液为高盐溶液,偏酸性或者偏碱性,含有较高浓度的去垢剂、变性剂,或使用低温孵育,应适当增加酶量(2-5)或延长孵育时间(1-3h)